通过本的救生犬
本文最初发表于4月13日．
基于实时pcr的检测根据今天发表在《美国医学杂志》上的一项研究结果，用干燥的血斑来筛查新生儿导致听力损失的病毒并不是一个可行的选择，因为它没有足够的敏感性美国医学协会杂志．
尽管如此，根据该研究的主要作者和其他专家的说法，对唾液等其他体液的PCR检测仍有希望作为新生儿感染的常规检测。
这项研究的重点是巨细胞病毒，这是先天性感染的重要原因，也是儿童感音神经性听力损失的主要原因。据估计，美国每年有2万至4万名患有先天性巨细胞病毒感染的婴儿出生，其中90%至95%在出生时没有可检测到的临床异常，因此无法通过常规临床检查发现。
研究人员在他们的论文中写道，为了在生命早期识别有风险的婴儿，“需要快速、可靠和相对便宜的方法来筛查新生儿先天性巨细胞病毒。”“在生命早期识别cmv相关SNHL风险增加的儿童将允许有针对性的监测……以便在获得言语和语言技能的关键阶段进行干预。”
目前，基于组织培养的唾液或尿液样本病毒抗原荧光检测是新生儿CMV筛查最常用的方法。然而，这种技术不适合大规模筛查，因为它是劳动和资源密集型的，需要组织培养设施。
另一方面，PCR更适合于大容量和通量的筛选，而且通常更便宜。PCR可用于检测多种新生儿标本，包括唾液、尿液和DBS;然而，由于DBS在美国被常规收集用于所有婴儿的代谢筛查，因此开发使用这些样本的PCR检测一直有很大的推动作用。
这项由阿拉巴马大学伯明翰分校儿科医生Suresh Boppana领导的新研究，试图提供DBS实时PCR检测与唾液或尿液样本病毒抗原荧光检测的首次直接比较，这被认为是新生儿CMV筛查的金标准。
Boppana告诉PCR内幕本周发表了多篇论文，声称DBS PCR检测具有高度敏感性。然而，这些论文大多数都是对选定的婴儿人群进行了检测，没有一篇论文将DBS PCR检测结果与标准方法(如组织培养)进行了比较。
Boppana说，大多数研究都检查了已经被筛查为CMV感染阳性的婴儿，然后用PCR方法对他们进行测试。
“它们没有分母，”他说。“他们不知道有多少(积极因素)被遗漏了。我不知道如果你不把它与金标准进行比较，你怎么能得出一个准确的灵敏度。我相信我们是第一个将PCR与标准筛选进行比较的人。”
如在《美国医学会杂志》研究在2007年3月至2008年5月期间，Boppana和同事测试了从美国7个医疗中心出生的婴儿身上收集的样本。在入组时，收集参与研究的婴儿的唾液样本以及代谢筛查时获得的血点。
对于每个DBS，研究人员使用具有magattraction技术的Qiagen M48机器人系统提取DNA;vwin德赢ac米兰合作并使用Life Technologies Applied Biosystems 7500实时PCR系统和Thermo Scientific公司AbGene业务的绝对qPCR Low ROX Mix检测CMV DNA。
在本研究的前10个月，real-time PCR检测方法中加入了用于检测主要包膜糖蛋白b高度保守的AD-1区域的引物。在研究的最后5个月，对该方法进行了修改，加入了来自高度保守的即刻早2外显子5区域的第二组引物，以提高其敏感性。Boppana和UAB的同事开发了这两种测定方法。
20,448例婴儿中有92例确诊先天性巨细胞病毒感染，其中91例用唾液快速培养法检测阳性。在使用单引物DBS PCR筛查的11422名婴儿中，60人中有17人(28%)有阳性结果。与此同时，在使用双引物法筛查的9026名婴儿中，32人中有11人(34%)筛查呈阳性。
研究人员从他们的数据中推测，即使采用双引物方法，也有多达80%的先天性巨细胞病毒感染婴儿可能被PCR遗漏。
Boppana说:“基本上，基于目前可用的PCR方法，它不是很容易被检测到。”“这有点令人失望，因为这是一项消极的研究，但这并不令人惊讶。”
然而，问题可能不在于PCR方法。的确，Boppana和他的同事们积极地测试和比较了他们的DNA提取和扩增程序与其他方法。“我不认为这是导致我们的结果的原因，”他说。
相反，Boppana说DBS的使用可能是不同的制造者。“这可能不是正确的做法，”他说。
事实上，DBS已经是一种强制性的程序，再加上几项已发表的研究结果表明，外周血的PCR可用于检测免疫功能受损的成年人的侵袭性CMV感染，这使得研究人员推动使用婴儿DBS样本进行基于PCR的测试。
然而，正如研究人员在《美国医学会杂志》本文认为，先天性巨细胞病毒感染的发病机制可能与免疫功能低下的宿主不同。事实上，这些患者通常在血液PCR检测前经历症状性再激活的急性CMV感染。
同时，先天性感染的婴儿可能在出生前几个月就已经获得巨细胞病毒感染，在检测时不再是病毒血症。“我们真的没有办法知道他们被感染了多长时间，”Boppana说。
然而，仍有希望开发一种快速、廉价的基于pcr的先天性巨细胞病毒感染筛查方法。Boppana说:“PCR检测还有其他可能性，比如唾液或尿液样本。”
事实上，他的研究小组目前正在研究基于pcr的婴儿唾液样本巨细胞病毒检测。虽然他们的工作还没有完成，他们刚刚开始准备发表的手稿，但Boppana说，早期的结果“看起来很有希望”。
支持这一观点伴随的社论今日出版于《美国医学会杂志》，犹他大学医学院的詹姆斯·贝尔(James Bale)写道，Boppana及其同事的发现并不一定意味着应该放弃普遍筛查CMV的目标。
Bale写道:“虽然目前的组织培养方法过于耗时和昂贵，无法用于新生儿的大规模筛查，但分子检测方法可以为CMV提供高通量筛查。”
他补充说:“虽然分析新生儿干血点可能不是解决方案，但在生命最初几天获得的样本中检测病毒DNA仍然是可能的。”“一种可能的方法是考虑分析婴儿唾液样本，而不是分析血液。几乎所有先天感染的婴儿的唾液都含有大量的巨细胞病毒DNA，可以用目前的PCR方法检测到。”