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GigaGen开发的液滴PCR单细胞测序系统,将靶向免疫应用

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通过Molika阿什福德

还早为此,GigaGen公司本周讨论了其开发和商业化单细胞分析微流体平台的计划,该公司希望将其作为免疫细胞测序工具来监测和诊断疾病。

上周,流体公司Dolomite宣布计划在今年晚些时候开始销售液滴融合芯片,这是GigaGen大型液滴微流体系统的一部分,GigaGen首席执行官David Johnson表示PCR内幕该公司最近完成了红杉资本(Sequoia Capital)和克莱蒙特克里克风险投资公司(Claremont Creek Ventures)的一轮小型种子融资,计划用这笔资金支持整个系统的开发和商业化。他拒绝透露GigaGen筹集了多少资金。

Johnson将该系统称为“Cell-Seq”,描述为“大规模并行单细胞测序”。他说,该系统将能够使用一种特殊的多重PCR结合标准的下一代测序技术来分析数百万个单个细胞。vwin德赢ac米兰合作

Johnson说:“通过对液滴内包裹的单细胞进行多重PCR,我们能够测量每个单细胞数十个位点的表达。”

尽管该技术与其他水滴Pvwin德赢ac米兰合作CR技术(如RainDance和QuantaLife)有一些共同的基本设计前提,并与其他免疫测序工作有一些共同的市场目标,Johnson说GigaGen公司相信其Cell-Seq将填补一个独特的利基市场。

他解释说:“我们的基本前提是液滴技术,就技术的前提而言,它很像Raivwin德赢ac米兰合作nDance或QuantaLife,但我们做的事情非常不同,因为我们对那些人感兴趣的东西不感兴趣,不感兴趣的是数字PCR或序列捕获。”

约翰逊说:“(我们的)是一个更复杂的问题,因为只是把干净的DNA或RNA……放入液滴中,这真的不是那么难,但细胞是脂质、蛋白质、DNA、RNA和多糖的混合物,所以除了首先溶解细胞外,你必须做很多复杂的事情。”

“你不能只是把一个细胞放入聚合酶中,就期望得到扩增。还需要采取更复杂的步骤。”例如,“RainDance只测量每个液滴中的一个位点……不使用细胞作为输入,所以我们的技术的输入和输出是完全不同的。”

Johnson解释说,GigaGen的系统包括溶解单个液滴中的细胞,加入专有的聚合酶链反应混合物,并进行“高级多重聚合酶链反应”。

他说:“这使我们以后能够从液滴中提取PCR产物,并对产物进行下一代测序。”

约翰逊表示,任何下一代测序平台都可以与GigaGen的技术兼容。vwin德赢ac米兰合作该公司目前正在与Illumina的机器合作,但“我们真的没有理由不能使用任何平台,”他说。

Johnson说,免疫测序已经成为其他公司的目标,尤其是Sequenta。然而,他说,GigaGen公司相信其单细胞液滴方法比其他方法更有优势。“通过分析单个细胞,我们可以添加一层功能分析。我们的技vwin德赢ac米兰合作术就像是将流式细胞术和Adaptive Biotechnologies及其子公司ImmunoSeq等公司所执行的细胞测序结合到一个单一的试验中,他说。

Johnson解释说,使用GigaGen的液滴多重PCR系统进行单细胞分析,可以填补目前只有流式细胞术提供的细分市场,但加入了下一代测序更深层次的分析。

“流式细胞术在多路复用和获取任何类型的序列数据方面都存在很多问题。你无法从抗体染色中获得序列数据,”他说。

例如,如果研究人员想探索不同类型免疫细胞的克隆扩增,并了解不同克隆的组成,“目前没有技术可以做到这一点,”他说。vwin德赢ac米兰合作

Johnson指出,GigaGen的平台将实现“那些表达位点的物理连接,告诉你你是调节型T细胞还是辅助型T细胞——T细胞受体和那些其他位点之间的连接……这样你就可以把文库放在下一代测序系统上,通过T细胞受体进行测序,一直到你关心的特定表达位点。”

“每个T细胞在其T细胞受体中都有一个特定的基因序列。每个B细胞的免疫球蛋白都有一个特定的序列。”约翰逊补充道。“流式细胞术无法获得这些数据。如果你想开发高价值的诊断方法,观察这些特定的克隆体可以为个体提供更特异性、更个性化的诊断。”

GigaGen并不是唯一一家从事单细胞基因组学研究的公司。Fluidigm本月报告称,单细胞应用目前推动其bioark HD系统(PCR内幕2/16/2012).

Johnson说,虽然这是一个伟大的系统,但基于液滴的分析可以进一步满足研究领域的需求,这些领域需要分析数百万个而不是数百个单细胞的能力。

为了获得像免疫系统这样复杂系统的完整画像,“免疫学家最终用户要求观察数百万个细胞。”因此,测量100或1000个细胞的技术“远远不够”,他说。

Johnson说,该公司在免疫细胞领域的另一个应用是最小残留疾病监测。

他说,该公司的目标与Sequenta等其他免疫测序工作类似,但GigaGen希望其系统不仅能够跟踪白血病克隆细胞,还能通过其单细胞方法提供功能信息,从而提供更多的特异性。

此外,GigaGen公司认为该系统可以成为筛选循环肿瘤细胞的好工具。

约翰逊说,ctc“可能罕见到十亿分之一的血细胞,使用抗体对细胞进行分类,然后从基因上分析它们的方法是缓慢、繁琐和不准确的。测量100或1000个细胞并不能解决问题。”他声称GigaGen的系统可以“在不使用抗体的情况下筛选数百万个细胞”。

据约翰逊介绍,GigaGen正在与两个学术团体合作——一个在希望之城,另一个在斯坦福——这两个团体目前正在使用该公司的技术。vwin德赢ac米兰合作

他拒绝透露参与研究小组的细节,但他表示,斯坦福大学的研究小组正在进行一个项目,研究接受过移植手术的患者的免疫系统。

尽管GigaGen最近的种子融资规模不大,但Johnson表示,该公司希望在今年夏天的某个时候进行规模更大的a轮融资。


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