纽约(基因组网)——为了测量HIV病毒载量，休斯顿莱斯大学的研究人员开发了一种技术，将等温重组酶聚合酶扩增(RPA)提升到一个新的水平。
该方法被称为实时定量RPA，或qRPA，于上个月发表在《美国科学》杂志上分析化学．它使用内部控制DNA生成一条标准曲线，然后使用一种算法分析实时荧光数据并量化样本中的HIV-1 DNA。
研究人员表明，qRPA技术在四个数量级上是准确的，并且能够在一个数量级内正确预测平均HIV-1 DNA浓度。它对于低浓度的模板DNA也是最准确的，但仍然将含有10份或更多HIV-1 DNA的样本归类为阳性。所有这些结果表明，他们的试验可能满足有用的HIV-1病毒载量测试所需的临床基准。
该小组现在希望将这项技术发展成为一种即时检测方法，以在资源匮乏的环境中测vwin德赢ac米兰合作量艾滋病毒载量。
在一次采访中PCR内幕，共同作者Zachary Crannell和Brittany Rohrman解释说，使用标准曲线可以对未知样本进行量化，因此，可以运行单个样本，而不必每次都运行标准曲线。
他们还指出，一种快速的病毒载量测定方法可能对艾滋病毒治疗非常有用。Rohrman说，在集中检测实验室检测干血点的周转时间可达4至6周。
“很多人没有尽快开始治疗，很多人失去了随访。(我们的化验)使人们能够在护理时得到诊断，并立即得到他们需要的治疗。”
两名研究人员都是赖斯大学丽贝卡·理查兹-科特姆实验室的博士生，他们通过放大来自200bp基因的内部控制来校准测定方法隐孢子虫以及DNA。
这种插入的对照可能是任何在人类血液中不常见的DNA，但该小组具有隐孢子虫的专业知识，并发表了一种基于rpa的检测方法分析化学今年早些时候。
Crannell表示，在开发该控件时，他们与艾雷公司TwistDx的技术服务人员进行了合作。
最近有许多使用TwistDx RPA化学开发的分析报告，如所述PCR内幕．然而，这是第一次使RPA测定定量。
罗尔曼说:“人们已经证明，信号转为阳性的时间与(核酸的)数量之间存在相关性，但之前没有人使用标准曲线来量化样本，也没有人确定使用这种方法进行量化时的准确性。”
其他组织也在进行即时HIV病毒载量检测。据报道，加州理工学院的一个团队正在开发一种名为Slivwin德赢ac米兰合作pChip的数字PCR设备，可以进行环介导的等温扩增分析，以量化HIV病毒载量PCR内幕．去年8月，Alere宣布，它打算使用收购TwistDx时获得的RPA化学技术进行HIV病毒载量测试．
克兰内尔说，与此同时，莱斯大学的团队已经在与一些潜在的商业合作伙伴进行谈判。他说:“我们的实验室一直想把(分子检测)送到需要它们的人手中。”
Rohrman补充道:“我认为我们与合作者的关系已经很好了，但当然，我们始终保持开放和乐意与其他可能感兴趣的人合作。”Crannell还指出，该小组正在开发其他可能适合合作的分析方法。
qRPA研究由比尔和梅琳达·盖茨基金会资助，据其网站称，该基金会已经向世界各地的组织提供了25亿美元的艾滋病毒赠款。该基金会特别关注为低资源环境开发即时病毒载量测试。
Crannell和Rohrman说，他们从目前可用的其他等温核酸扩增技术中选择了RPA，即LAMP和基于核酸序列的扩增技术(NASBA)。
“NASBA和LAMP是我们在实验室里使用过的东西，但我们在让它们持续工作方面遇到了一些困难，”Rohrman说。
Crannell说:“我们被RPA吸引的原因之一是它可以在相当低的放大温度下工作，而且使用非常简单，不需要太多的基础设施。”“我们的很多技术都是为低资源环境而设计的，用于设备不一定像美国或加拿大的诊断实验室那样齐全的实验室。”
的分析化学研究使用台式热循环器来控制反应过程中的温度。然而，Crannell和Rohrman提出qRPA可以适用于低成本的商业阅读器，如Qiagen公司的ESEQuant管扫描仪或TwistDx公司的Twista便携式实时荧光计，它们有一个加热的孵卵室，由可充电电池组供电。
“我们认为这项工作最新颖的一点是，它表明你可以真正量化单个样本，而不必每次都运行标准曲线。我们认为这在该领域非常有价值，”罗尔曼说。