罗氏NimbleGen正准备推出一种新的目标富集产品,用于下一代测序,称为Heat-Seq,它依赖于经过经验测试的分子反转探针。
本月早些时候,在佛罗里达州奥兰多举行的基因组生物学和技术进展会议上,罗氏NimbleGen的开发主管Daniel vwin德赢ac米兰合作Burgess提供了一些关于新的目标富集产品线的细节,该产品线是罗氏诊断公司的业务部门罗氏测序的一部分。
伯吉斯解释说,分子反转探针(MIPs)是一种寡核苷酸,其两端与基因组目标杂交,形成一个可以填充和放大的圆圈,这种探针在几十年前被发明出来,已经被用于许多研究项目来放大目标DNA。
例如,哈佛医学院乔治·丘奇团队的研究人员发表了一篇论文在自然方法在2007年的一项研究中,他们使用修饰过的MIPs以55000个外显子为目标,并通过测序检测了其中的10000个。
然而,到目前为止还没有MIP的商业版本,MIP没有被广泛使用的原因有几个,Burgess说:它们的使用协议很难开发,很少有软件可以分析MIP数据,探针设计具有挑战性,只有不到90%的MIP从一开始就正常工作。另外,由于各个探测的效率不同,MIP库需要进行优化。
Heat-Seq使用了MIPs的“高级版本”,他说,NimbleGen使用微阵列技术克服了探头设计的挑战,该技术允许该公司在选择之前综合和评估大量探头,并为定制面板建立了一个大型的探头设计数据库。vwin德赢ac米兰合作
Heat-Seq的工作流程,包括库的准备但不包括测序,总共需要6.5小时,包括1.5小时的动手时间,并在一个试管中结合了几个酶的步骤。罗氏已经开发了分析Heat-Seq富集数据的软件。
最初,罗氏将推出两个固定内容的肿瘤学面板——Heat-Seq肿瘤学和Heat-Seq Ultra肿瘤学热点——以及包含肿瘤学、遗传疾病研究和基因分型内容的定制面板。据该公司称,这种自动化友好的方法承诺高吞吐量,使其非常适合涉及大量样本的项目。
Heat-Seq Oncology覆盖了60个癌症基因,总共240个碱基的目标序列,使用了5144个探针。Heat-Seq Ultra Oncology Hot Spot由53个癌症基因中的热点区域组成,用635个探针覆盖30个碱基的靶序列。
根据罗氏的说法,定制面板可以包含大约2万个探针。例如,遗传病组可包含多达420个孟德尔疾病相关基因,肿瘤学组可包含多达500个癌症相关基因。此外,在测序基因分型应用中,客户可以从76,000个snp中进行选择,由76,000个探针覆盖。
最初,Heat-Seq将只支持Illumina测序平台。罗氏说,目录和定制面板的价格还没有出来,但预计将与其他目标富集系统具有竞争力。