本文已更新，包括Singleron生物技术公司获得监管批准计划的更多信息。
总部位于中国的单细胞测序技术公司Singleron Biotechnologies正在向欧洲扩张，并着眼于最终进入美国。vwin德赢ac米兰合作
今年1月，该公司在德国科隆开设了办事处，并于3月开始在那里建立实验室，向欧洲客户提供单细胞分析服务。
为了区别于市场领导者10x Genomics, Singleron为临床和转化研究人员量身打造了工作流程。
“临床应用需要完整的解决方案，从样本保存到报告，”Singleron首席执行官兼联合创始人Fang Nan说。在为临床研究设计的特征中有一个专有的样品保存缓冲液，可以保持细胞存活72小时，酶和化学试剂的混合，以帮助分离组织中的细胞，传统上抵抗单细胞分析-甚至皮肤，脂肪和骨骼。该公司还开发了一套生物信息学套件来帮助分析。
该平台的核心是Matrix，这是一种基于微井的细胞隔离和库制备仪器，最多需要两个高通量芯片，每次运行可以处理10,000或30,000个细胞或核。Singleron还开发了用于特定单细胞分析的试剂盒，包括基因表达分析、免疫细胞分析和RNA表达动态，以及一个多路复用套件，允许组合多达16个样本。
在中国，该平台已经站稳脚跟，尤其是在医院，医院占该公司客户的80%左右，剩下的是制药和基础研究人员。Singleron的业务发展总监陈媛媛(音)说，到目前为止，Singleron的平台已经用于超过2000个研究项目，对来自300多种不同样本类型的5000万个细胞进行了测序。以南通大学医学院为例，该校生殖医学研究所副所长、教授陈皓说，11名进行单细胞实验的研究人员中，有5人使用了Singleron。陈皓利用该公司的服务研究男性生殖系统。
现在，Singleron公司可以将其技术提供给欧洲研究人员vwin德赢ac米兰合作，他们希望将单细胞分析应用于分子诊断，这可能比现有的方法便宜。
虽然其欧洲业务才刚刚开始，但该公司自2018年以来就在中国非常活跃。方舟子曾任Qiagen(凯杰)全球研发副总监和诺沃金(Novogene)副总经理，自2014年合作以来，他认识了耶鲁大学(Yale University)教授范荣(Rong Fan)，后者创办了几家公司，将自己实验室开发的分子技术商业化。“我们都对单细胞技术非常感兴趣，”方舟子说。“2017年，我们看到了高通量单细胞测序技术的迅速采用，我们都更清楚地看到了其商业潜力。我们希望成为我们所看到的这一趋势的一部分。”她说，他们两人都希望将单细胞测序技术应用于临床，并对如何改进单细胞测序技术有一些想法。
在第一年，Singleron专注于开发Fan的单细胞冻融裂解技术，这是针对3' mRNA测序技术vwin德赢ac米兰合作在2019年出版，转化为可行的商业产品。该单细胞基因表达产物使用独特的分子标识符(UMI)-条形码珠通过其poly-A尾捕获3' mrna。到2019年初，该公司推出了一种用于微井芯片的手工库准备工具包，并开始提供服务。在那一年里，研究人员致力于图书馆准备工作的自动化，这就是他们在COVID-19大流行期间推出的Matrix仪器。
方舟子说:“我们在2020年3月底被冻结了设计，但我从美国回到中国后仍然被隔离。”“工程师们必须通过视频向我展示最终产品。”该公司还必须与无法按时交付零部件的供应商打交道。
方说，现在，该公司有340名员工，已经筹集了近1亿美元，包括2020年9月的3000万美元a轮融资，由礼来亚洲投资公司领投，新投资者鼎晖投资、Arch Venture Partners、腾讯、CDG资本以及现有投资者Sherpa Healthcare Partners和中国成长资本加入。
方舟子说，该公司计划将这笔资金用于为仪器和试剂建立良好的生产实践设施，并为其产品获得监管部门的批准。公司已经获得了医疗器械在中国的一级注册和欧洲的CE标志，目前正在争取获得II级和III级注册和CE- ivd标志。“当然，我们还计划开发更多的产品，包括仪器和试剂，并探索海外市场，”她说，其中“肯定”包括美国。
该公司已经与安捷伦科技。方表示，她的团队将研究安捷伦质量控制和定向测序产品在Singleron工作流程中的应用方法。
Singleron还获得了耶鲁大学的其他知识产权授权，但拒绝透露这些专利包括哪些内容。该公司正在争取中国和欧洲的临床监管机构批准Matrix。
Singleron加入了由10x基因组公司主导的市场，该公司拥有令人羡慕的品牌认知度，也成为单细胞数据质量的衡量标准。其他提供单细胞RNA-seq解决方案的公司包括Bio-Rad实验室，1 cellbio,解析生物科学．
陈皓说，就性能而言，Singleron的工作流程与10x Genomics公布的数据类似，尤其是在每个细胞的基因数量方面。虽然他没有使用过10x平台的数据，但他使用过Smart-seq 2单细胞RNA-seq协议。对于他发送的样本，通常来自附睾和睾丸，Singleron返回的平均每个细胞大约有2000个基因。“附睾样本很难收集，所以可能有什么东西损坏了细胞，”他说。他的实验目标是每个样本5000到10000个细胞，以保持测序成本合理。
陈媛媛说，对于Singleron的基因表达分析，灵敏度，以每个细胞的UMIs和基因测量，类似于10倍。她说:“我们并没有说我们变得更好，但至少我们的表现处于同样的水平。”
Matrix仪器的电池捕获率在30%到60%之间，这取决于芯片类型。整个工作流程大约需要一天，“一个有经验的人需要八到九个小时，”她说，但它可以在产生cdna后在中间分裂。另一个不同之处在于，该方法适用于多个下一代测序平台，包括Illumina和华大基因。
陈皓说，目前在中国，Singleron的方法比10倍的方法更便宜，每个样品大约2万元人民币(3086美元)。“据我所知，10个样品的价格是2.5万元人民币。”
Singleron的渊源陈称，该公司能够以比10倍基因组公司低30%的价格为其10,000细胞芯片提供套件。她说:“如果客户使用我们的高密度芯片，他们基本上支付了10倍的成本，但获得的电池数量是原来的三倍。”(不过，10x公司最近发布了一款多路复用试剂盒，可以在试剂芯片上每道检测多达30,000个细胞的基因表达谱，而原来是10,000个细胞。)
虽然成本一直是一个问题，但帮助临床研究的能力是一个主要卖点。科隆分子医学中心(Center for Molecular Medicine Colovwin德赢ac米兰合作gne)教授玛格丽特·奥登塔尔(Margarete Odenthal)说:“这就是我看到这项技术与10倍相比的优势所在。”她正试图将单细胞测序技术引入分子病理学实验室”。最初，我们希望在癌症病理学中建立这项技术，但后来我可以想象，单细胞测序分析在慢性炎症疾vwin德赢ac米兰合作病或其他疾病中也将非常重要，”她说。
她已经与该公司和中国的研究人员合作，利用Singleron平台研究非小细胞肺癌，现在正与该公司合作，将这项技术带入她的实验室。vwin德赢ac米兰合作
上个月发表在自然通讯，研究人员报告了42个样本的研究结果，表明肺鳞癌比肺腺癌具有更高的肿瘤间和肿瘤内异质性。
“RNA对降解非常敏感”，细胞在处理过程中可能进入凋亡，使它们不再代表样本，奥登塔尔说。保存细胞多达三天的能力可以解决这些质量问题，并允许从处理实验室采集样本。这也将为使用单细胞分析进行诊断提供一个机会。“这很贵，有时不值得做，”她说。“有了这额外的三天时间，我们至少可以做一些组织学分析。”
她补充说，这种方法对几种不同类型的肿瘤都很有效。她说，肺腺癌很容易溶解，尽管样本中经常有大量细胞外基质和疤痕组织。由于和Singleron的欧洲业务在同一个城市，奥登塔尔能够让公司的人来到她的实验室，帮助他们建立工作流程，预先设置的生物信息学分析也很受欢迎。
郝晨表示，他能够从样本中得到在其他平台上可能无法工作的结果。他说:“一般来说，大多数公司要求样本中的细胞存活率在90%以上。”“然而，在真正的实验中，对特定组织获得如此高的存活率并不容易，所以如果存活率大于85%，我们的实验将继续进行下一步。Singleron公司的组织分离溶液始终能给我们提供满足这些要求的结果，并产生良好的测序结果。”每个样品的周转时间在20到30天之间，他与公司的互动始终是“专业和高效的，”他说。“我总是能得到项目状态的更新。”
随着该公司的技术在世界范围内的普及，方vwin德赢ac米兰合作说她认为单细胞分析的临床实施“并不遥远”。她指了指一生的计划例如，欧洲主导的精准医疗努力及其对单细胞技术的关注。她说:“这可能会比很多人目前认为的更快发生。”