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牛津纳米孔吹捧技术改进,包括PromethIon,准确性,自动化

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牛津纳米孔技术公司本周在今年在线举行的纳米孔社区会议上宣布了一系列产品发布、技术改进和开发项目。vwin德赢ac米兰合作

平台技术副总裁James Clarke表示,公司已经对PromethIon平台进行了vwin德赢ac米兰合作几项改进。“这可能是我们在该平台上表现最好的6个月,”他说。

首先,该公司已经克服了PromethIon芯片与ASIC的连通性和微井结构的一系列制造问题。“好消息是,这些问题已经得到了解决,”克拉克说,因此,PromethIon客户站点的测序产量一直在上升。

他说,该公司还重新加工了用于容纳测序芯片中纳米孔的合成膜,提高了其稳健性和一致性。他说,新膜现在是PromethIon、GridIon、MinIon和Flongle测序仪的测序芯片的一部分,这应该会减少与膜相关的测序失败。

该公司的研究人员还改进了PromethIon芯片的纳米孔插入方法,将孔的数量增加了20%到25%,这将转化为更大的数据输出。该公司几周前推出了新的芯片。

他说,牛津纳米孔公司已经创造了PromethIon输出的新记录,通过使用6种不同的pcr扩增人类DNA样本,使用48个流细胞运行的单一仪器,实现了10万亿数据库的数据。在此运行中,每个流单元的输出中值为208千兆字节,单个流单元的最大输出为242千兆字节。

他说,对于只对100千碱基范围内的超长读取感兴趣的用户,该公司开发了一种超长读取套件,以最大化这些读取。该试剂盒使用了一种与Circulomics合作开发的DNA提取和纯化方法,不过客户也可以使用其他提取方法,它采用了该公司的转座酶化学方法,比需要使用珠粒的基于连接的化学方法更温和。

Clarke表示,通过使用内部超长读取套件,公司研究人员已经能够从单个PromethIon流池中获得约90千兆的数据,N50读取长度超过100个碱基,并建立了4.15兆的读取长度新记录,几乎是之前记录的两倍。

总的来说,PromethIon的输出取决于读取长度,他说:使用为10到30千基读取设计的库,用户可以预期每个流单元大约220千基的数据。对于100千碱基左右的超长读取库,每个流单元将产生大约100千兆字节,需要在4天的运行时间内与仪器进行4次交互。客户现在还可以使用条形码在每个PromethIon流动细胞中聚集多个样本,例如,两个人类基因组覆盖30X,或三个人类基因组覆盖20X。

他说,为了进一步提高输出,牛津纳米孔公司正在研究一种新的流动电池设计,该设计具有更深的井,可以吸收更多的介质溶液——电流通过小孔所需要的介质溶液——以及一种将通道数量增加10%的方法。

对于低产量的Flongle,公司已经能够增加产量,满足今年夏天的需求,Clarke说,“希望随着需求的增加,我们可以继续这样做。”Oxford Nanopore还在研究新方法,将Flongle流式电池的生产成本降低到“几美元”,他补充道。

Clarke还提供了一个长期研发项目的最新进展,该项目旨在用纳米孔周围的电压传感取代目前的电流传感。这将使该公司能够将纳米孔和底层电子器件封装得更紧密。“风险很高,但回报很高,”他说。他补充说,该公司在这方面“过去六个月取得了比以往任何时候都多的进展”,预计今年年底将推出ASIC原型。

该公司还进一步提高了数据的准确性。根据开发副总裁Stuart Reid的说法,使用名为Bonito的新基本调用器,模态原始读取的准确性现在已经达到了98.3%。他还暗示,两种新的测序化学物质正在开发中,可以提供超过99%的单次原始读取精度,但他没有提供细节或商业化时间表。

Bonito目前作为研究版本在Github上可用,预计将在明年2月或3月整合到MinKnow平台。此外,公司还对共识基调用、SNP调用和结构变量调用的各种工具和方法进行了改进。

Reid说,新的基本调用程序,结合超长读取套件,可以从60X覆盖数据中产生“非常可观的人类集合”。添加Pore-C装配方法还允许公司从非常少量的数据中生成参考质量的装配。

Oxford Nanopore已经将这些方法应用于端粒到端粒(T2T)联盟的数据,他补充说,该联盟对单倍体细胞系CHM13进行了测序,并能够生成更连续和更精确的组装。

此外,该公司还开发了一种新的cDNA测序试剂盒,可用于单个和条形码样本,可以生成更多的全长转录本。目前,该软件已向早期用户开放,预计将于明年第一季度推出。

Reid指出,在甲基化测序方面,该公司发现其新的R10.3纳米孔似乎比之前的R9.4.1纳米孔更能发现甲基化信号。

自适应采样,即对一个DNA分子进行一小段时间的测序,用户可以随时决定他们是想继续测序还是转移到一个新的DNA链,现在已经发布了GridIon作为一个与MinKnow平台完全集成的版本。接下来是Mk 1C和PromethIon的集成版本。

产品管理副总裁Rosemary Dokos提到了图书馆准备自动化的几个发展。例如,该公司已经发布了Hamilton NGS Star液体处理程序的协议,该程序与一种名为liging kit XL的套件相结合,可以在5小时内制备96个样品。

该公司还与小型自动化解决方案制造商Opentrons合作,为其LamPore COVID-19检测开发自动化工作流程,该检测带有ce标记,并在GridIon Q-Line仪器上运行。她说,这需要一个价值1.8万美元的Opentrons液体处理程序,每天可以进行2500次LamPore检测。她说,“我们对未来将与Opentrons共同开发的协议感到非常兴奋。”牛津纳米孔公司也在开发用于MinIon和Mk 1C临床和诊断的q型。

最后,VolTrax样品准备装置也得到了发展。dodos说,该公司已经开发了一种可用于pcr的墨盒,计划明年推出,这将要求VolTrax现有用户升级他们的设备。

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